西北农林科技大学杨小军获国家专利权
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龙图腾网获悉西北农林科技大学申请的专利一种蛋鸡肝脏类器官天然脂质沉积模型的构建方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119530127B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-05-08发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411561319.1,技术领域涉及:C12N5/071;该发明授权一种蛋鸡肝脏类器官天然脂质沉积模型的构建方法是由杨小军;王译彬;侯起航;刘瑞;刘艳利设计研发完成,并于2024-11-04向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种蛋鸡肝脏类器官天然脂质沉积模型的构建方法在说明书摘要公布了:本发明涉及细胞培养技术领域,公开了一种蛋鸡肝脏类器官天然脂质沉积模型的构建方法,验证了1日龄蛋鸡肝脏组织脂质合成和转运相关功能更加活跃,所分离出的肝脏类器官及肝脏原代细胞呈现同样趋势,存在较多脂质沉积,因此选用1日龄蛋鸡肝原代细胞所培养的类器官作为一种天然体外脂质沉积模型。为了解决蛋鸡内源脂质沉积模型建立困难的技术问题,本发明通过分离1日龄蛋鸡原代肝细胞,并对类器官接种及培养技术进行改进,成功构建一种原代肝细胞来源的蛋鸡肝脏类器官天然脂质沉积模型,降低了研究成本,且具有更高的脂代谢活性,为蛋鸡肝脏脂代谢及相关疾病机制的研究提供了理想的离体模型。
本发明授权一种蛋鸡肝脏类器官天然脂质沉积模型的构建方法在权利要求书中公布了:1.一种蛋鸡肝脏类器官天然脂质沉积模型的构建方法,其特征在于,包括以下步骤: 1取蛋鸡肝脏,剔除系膜和胆囊,转移至含2%青链霉素的预冷PBS中,清洗2~3次,直至PBS清澈; 2将步骤1处理获得的蛋鸡肝脏组织置于离心管,加入500μL含2%青链霉素的PBS,剪为肝脏组织碎片; 3将步骤2获得的肝脏组织碎片转入新的离心管中,用含2%青链霉素的PBS自然沉降清洗所述肝脏组织碎片2~3次,4℃,700rpm,离心3min,收集肝脏组织碎片; 4将步骤3获得的肝脏组织碎片转移至含10mL肝解离液的离心管,37℃水浴消化30min,期间每隔10min取出离心管,用力上下摇晃30s;消化结束后,用力上下摇晃30s,收集带有肝细胞的消化液; 5将步骤4收集的带有肝细胞的消化液用70μm细胞滤网过滤,将滤液转移至新的离心管,4℃,1500rpm,离心5min,收集肝细胞沉淀,去除消化液; 6用7mL含1%青链霉素的AdvancedDMEMF12重悬步骤5获得的肝细胞沉淀,4℃,1500rpm,离心5min,收集新的肝细胞沉淀,重复2~3次直至洗净,获得洗净的肝细胞; 7用生长培养基重悬步骤6获得的洗净的肝细胞,细胞悬液浓度约为600,000个mL,加入预冷的基质胶充分混合均匀,每孔接种50μL至24孔培养板培养孔中央; 8将步骤7制备的培养板放入细胞培养箱,静置30min,待基质胶凝固后,每孔加入500μL含1%青链霉素的HepatiCult™类器官生长培养基,放入细胞培养箱; 9每隔3d对蛋鸡肝脏类器官换液,获得蛋鸡肝脏类器官天然脂质沉积模型。
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