中国人民解放军海军军医大学李玲获国家专利权
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龙图腾网获悉中国人民解放军海军军医大学申请的专利一种基于LIP-MS技术筛选的紫草素作用靶点的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119395303B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-05-08发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411542608.7,技术领域涉及:G01N33/68;该发明授权一种基于LIP-MS技术筛选的紫草素作用靶点的方法是由李玲;吕磊;王辉;樊芳;夏哲炜;陈啸飞设计研发完成,并于2024-10-31向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种基于LIP-MS技术筛选的紫草素作用靶点的方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种基于LIP‑MS技术筛选的紫草素作用靶点的方法,涉及医药技术领域,其技术要点为:本发明采用广泛特异性蛋白酶对蛋白样品进行限制性酶解,利用药物与靶标蛋白结合可提升结合区域肽段构象稳定性的特性,进一步使用胰蛋白酶进行二次酶解,运用定量蛋白组学技术采集肽指纹谱,通过分析比较对照组和药物处理组肽指纹谱的变化,筛选出药物处理后专属性的“构象保持肽段”,通过数据库匹配鉴定肽段对应的靶标蛋白信息,相比传统的DARTS方法,基于肽指纹谱非标记的药物靶标分析将检测对象从蛋白转变成肽段,有望表征低亲和力的多靶点药物与蛋白相互作用、低丰度蛋白、大分子量蛋白局部构象变化信息,以提高靶标分析的准确度和灵敏度。
本发明授权一种基于LIP-MS技术筛选的紫草素作用靶点的方法在权利要求书中公布了:1.一种基于LIP-MS技术筛选的紫草素作用靶点的方法,其特征是:所述技术包含以下步骤: S1、蛋白提取:将单克隆白色念珠菌接种于1mLYPD液体培养基中,在30℃、200转分钟的条件下培养16小时;结束培养后使用PBS洗涤细胞三次,加入总量为5mL的蛋白质提取缓冲液,并与细胞体积两倍体积的酸化玻璃珠混合,在冰浴条件提取蛋白,使用BCA蛋白浓度测定试剂盒检测蛋白浓度,并用PBS稀释至1.0mgml,储存于-80℃冰箱待用; S2、有限蛋白水解:取100µg稀释后的蛋白溶液加入适当浓度的药物或DMSO,按酶底物比1:100向样品中分别加入蛋白酶K准确孵育样品3分钟后,加热灭活PK;随后加入使终浓度为5%的脱氧胆酸钠溶液,使终浓度为12mM的二硫苏糖醇,使终浓度为40mM的碘乙酰胺,以烷基化还原的半胱氨酸残基;按酶底物比wtwt1:100加入胰蛋白酶,37℃过夜孵育;通过加入98%volvol的甲酸至最终浓度为2%volvol来停止消化并沉淀脱氧胆酸钠;最后16000g离心10分钟,以去除沉淀物,并进行脱盐处理后,将上清液转移以供质谱分析; S3、质谱分析:白色念珠菌蛋白质组的定量通过基于SWATH的质谱法实现;数据的采集和分析在Analyst®1.7软件和ProteinPilot4.5上进行;使用Markerview软件和Uniprot数据库,通过Uniprot数据库建立差异蛋白质信息表;通过比较有效肽段的差异,筛选到紫草素作用于白念珠菌潜在的靶点; S4、靶点的验证:根据是否具有药物浓度依赖性对筛选到的靶点进行筛选和排序;通过综合分析药物结构,靶点功能,确认Fructose-bisphosphatealdolase为作用靶点,并采取相应验证。
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