中国科学院大连化学物理研究所张丽华获国家专利权
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龙图腾网获悉中国科学院大连化学物理研究所申请的专利基于荧光指示的目标蛋白表达细胞系的检测和/或筛选方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119666793B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-28发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202311208933.5,技术领域涉及:G01N21/64;该发明授权基于荧光指示的目标蛋白表达细胞系的检测和/或筛选方法是由张丽华;张蓓蓉;赵群;梁振;杨开广;张玉奎设计研发完成,并于2023-09-19向国家知识产权局提交的专利申请。
本基于荧光指示的目标蛋白表达细胞系的检测和/或筛选方法在说明书摘要公布了:本发明涉及基于荧光指示的目标蛋白表达细胞系的检测和或筛选方法,旨在实现底盘细胞内特定蛋白质构象的快速检测,同时能够高效筛选不同功能状态、活性和目标蛋白表达水平的底盘细胞。本技术与常规蛋白融合荧光标签用来指示蛋白质的技术的本质区别在于,本方法首先通过交联剂来反映蛋白质的构象变化,并且基于不同蛋白质构象下交联剂骨架荧光颜色的改变来反映其所处构象对应的功能状态。此技术为生物研究领域提供了一种方便、高效、非侵入性的方法,可广泛应用于细胞活性研究、药物筛选和蛋白质功能研究等领域。
本发明授权基于荧光指示的目标蛋白表达细胞系的检测和/或筛选方法在权利要求书中公布了:1.基于荧光指示的目标蛋白表达细胞系的检测和或筛选方法,其特征在于: 通过将具有靶向性和荧光特性的交联剂靶向到底盘细胞中的目标蛋白进行化学交联反应,利用目标蛋白本身的自身构象和或化学微环境的差异,引起交联剂骨架构象的变化,导致交联剂发射出不同颜色的荧光,用于快速检测和或高效筛选不同底盘细胞中目标蛋白的表达水平和或结构状态;交联剂具有反应基团且具有水可溶性和膜可透过性; 交联剂的反应基团为苯磺酰氟基团,苯氧磺酰氟基团,N-羟基琥珀酰亚胺基团,邻苯二醛基团,双吖丙啶基团中的一种或二种以上,交联剂的间隔臂长度为150Å; 通过在交联剂骨架中引入羟基基团,酰胺基团,磺酸基团,氨基基团,羧基基团,聚乙二醇基团中的一种或二种以上,实现交联剂的水可溶性; 通过在交联剂骨架中引入氨基基团,带正电基团,酰胺基团,聚乙二醇基团中的一种或二种以上,实现交联剂的膜可透过性; 其中,交联剂的靶向性通过在间隔臂骨架中添加目标蛋白的抑制剂的结构、目标蛋白的亲和基团的结构、目标蛋白的抗体、以及目标蛋白的相反电荷中的一种或二种以上实现; 通过在交联剂骨架中引入荧光分子罗丹明、荧光素、以及AlexaFluor系列分子及其衍生物中的一种或二种以上,实现交联剂骨架荧光特性; 交联剂交联不同底盘细胞中的目标蛋白后,基于目标蛋白自身构象及化学微环境对交联剂骨架荧光的特异性影响,交联剂呈现相应的构象状态,并发射出特定颜色和强度的荧光信号,颜色为红色、黄色或蓝色中的一种或二种以上; 其中底盘细胞中目标蛋白构象检测采用荧光共振能量转移技术、荧光激活的细胞排序技术、荧光显微镜分选以及荧光活细胞成像分选多种方法中的一种或多种; 用于监测交联剂骨架在不同构象状态下所发射的荧光信号,从而获取交联剂在底盘细胞中目标蛋白的结构状态信息。
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