江西中医药大学李志新获国家专利权
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龙图腾网获悉江西中医药大学申请的专利基于缺陷PAM锁的CRISPR/Cas12a系统、制备方法及应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN121271878B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-24发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202511847328.1,技术领域涉及:C12N15/115;该发明授权基于缺陷PAM锁的CRISPR/Cas12a系统、制备方法及应用是由李志新;杨婕;王小青;许梢华;陶映州设计研发完成,并于2025-12-09向国家知识产权局提交的专利申请。
本基于缺陷PAM锁的CRISPR/Cas12a系统、制备方法及应用在说明书摘要公布了:本发明提出一种基于缺陷PAM锁的CRISPRCas12a系统、制备方法及应用,本发明通过在AFB1适配体序列的5′端引入PAM序列,得到功能化AFB1适配体;在功能化AFB1适配体上引入错误的碱基,以生成突变序列;将功能化AFB1适配体与突变序列进行混合,得到完整缺陷PAM锁识别探针;将完整缺陷PAM锁识别探针与待测样品混合后进行第一次孵育,得到AFB1‑capt;将蛋白与预设计的crRNA混合后进行第二次孵育,得到核糖核蛋白复合物;对AFB1‑capt与核糖核蛋白复合物进行第三次孵育,得到目标系统。本发明通过构建了简单识别与信号放大系统,降低了实操难度与成本,同时减少背景干扰。
本发明授权基于缺陷PAM锁的CRISPR/Cas12a系统、制备方法及应用在权利要求书中公布了:1.一种基于缺陷PAM锁的CRISPRCas12a系统的制备方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤: 在AFB1适配体序列的5′末端引入PAM序列,得到功能化AFB1适配体; 根据碱基互补配对原则,预设计功能化AFB1适配体的完整互补链,在功能化AFB1适配体的完整互补链的3′末端引入一个错误的碱基,以生成突变序列;其中,引入错误的碱基的位置为功能化AFB1适配体的完整互补链的3′末端的第一位碱基、第二位碱基、第三位碱基、第四位碱基、第五位碱基或第六位碱基; 将功能化AFB1适配体与突变序列进行混合,通过加热后缓慢冷却得到完整缺陷PAM锁识别探针; 将完整缺陷PAM锁识别探针与待测样品混合后进行第一次孵育,得到AFB1-capt; 将LbaCas12a蛋白与预设计的crRNA在缓冲液中混合后进行第二次孵育,得到Cas12acrRNA核糖核蛋白复合物; 对AFB1-capt与Cas12acrRNA核糖核蛋白复合物进行第三次孵育,得到CRISPRCas12a系统。
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