深圳大学谷金科获国家专利权
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龙图腾网获悉深圳大学申请的专利一种肌质网钙泵囊泡的分离纯化方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119876003B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-24发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510093906.0,技术领域涉及:C12N5/077;该发明授权一种肌质网钙泵囊泡的分离纯化方法是由谷金科;吴博雯;张铭晖;周姿奕;梁周柱设计研发完成,并于2025-01-21向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种肌质网钙泵囊泡的分离纯化方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种肌质网钙泵囊泡的分离纯化方法,涉及生物技术领域。本发明提供的肌质网钙泵囊泡的分离纯化方法,依次将差速离心、蔗糖不连续密度梯度离心、凝胶排阻层析法进行结合,能够从骨骼肌中准确分离纯化得到肌质网钙泵囊泡,且囊泡结构完整,形状饱满,轮廓清晰,大小均一。有利于高分辨率冷冻电子显微镜对肌质网钙泵蛋白SERCA1的结构解析。对研究该酶催化ATP水解以及钙从细胞质转移到肌质网腔,并参与肌肉兴奋和收缩的机制奠定良好的基础。
本发明授权一种肌质网钙泵囊泡的分离纯化方法在权利要求书中公布了:1.一种肌质网钙泵囊泡的分离纯化方法,其特征在于,所述肌质网钙泵囊泡的分子量在100-140kDa之间,包括以下步骤: 步骤一:取骨骼肌组织,去除结缔组织,切成肉糜; 步骤二:将肉糜与裂解液混合并匀浆,得匀浆液;其中,肉糜与裂解液的质量体积比为0.1~2.0g:3ml; 步骤三:将匀浆液置于温度为2~8℃、离心力为1,000~5,000g条件下离心10~30min,得到上清液S1;将上清液S1过滤后,将滤液置于温度为2~8℃、离心力为10,000~30,000g条件下离心10~30min,得到上清液S2;将上清液S2过滤后,将滤液置于温度为2~8℃、离心力为100,000~300,000g条件下离心30~90min,得到沉淀P3; 步骤四:将沉淀P3重悬于缓冲液中,得到重悬液R1;往超离管中依次加入0.8~1.8M的不连续密度的蔗糖溶液以及重悬液R1,于温度为2~8℃、离心力为100,000~200,000g条件下离心1.5~3.0h; 步骤五:由上至下取出超离管内25~12体积的溶液,弃去,超离管内的剩余溶液经30~60kDa截留量浓缩管浓缩后,采用凝胶排阻层析法进一步分离,洗脱组分在6.0~12.0mL之间为肌质网钙泵囊泡; 所述步骤四中,蔗糖溶液由蔗糖及缓冲溶液配制得到,所述缓冲溶液含有0.1~0.3M氯化钾,4~6mM腺嘌呤核苷三磷酸,4~6mM氯化镁,1~3mM氯化钙,1~3mM乙二醇二乙醚二胺四乙酸,45~55mM磷酸钾,pH7.2~7.6; 所述凝胶排阻层析法所用的层析柱为Superose610300GL。
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