福建中医药大学张红艳获国家专利权
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龙图腾网获悉福建中医药大学申请的专利一种基于纳米磁珠的现场检测啶虫脒的荧光方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN118937680B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-24发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411336363.2,技术领域涉及:G01N33/58;该发明授权一种基于纳米磁珠的现场检测啶虫脒的荧光方法是由张红艳;刘悦;范申;余林欢;林舒设计研发完成,并于2024-09-25向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种基于纳米磁珠的现场检测啶虫脒的荧光方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种基于纳米磁珠的现场检测啶虫脒的荧光方法,属于分析化学和生物技术领域。该方法将修饰有生物素的啶虫脒特异性适配体Apt探针固定在修饰有链霉亲和素的磁珠MBs表面,当啶虫脒ACE存在时,Apt与啶虫脒相互结合形成稳定的MBs‑Apt‑ACE复合物。随后,加入标记了荧光量子点QD的cDNA,已经与啶虫脒结合的Apt无法再与cDNA相结合,此时使用磁铁将MBs除去,对上清液进行荧光检测。啶虫脒浓度越高,上清的荧光强度也越大,从而实现对啶虫脒的检测。
本发明授权一种基于纳米磁珠的现场检测啶虫脒的荧光方法在权利要求书中公布了:1.一种基于纳米磁珠的现场检测啶虫脒的荧光方法,其特征在于:将生物素修饰的啶虫脒特异性核酸适配体探针固定在链霉亲和素修饰的磁珠表面,当目标物啶虫脒存在时,核酸适配体与啶虫脒发生特异性结合,形成稳定的磁珠-适配体-啶虫脒复合物;随后,加入标记了荧光量子点的cDNA,已经结合了啶虫脒的核酸适配体无法与cDNA相结合,此时使用磁铁将磁珠除去,对上清液进行荧光光谱测定,从而实现对啶虫脒的检测; 所述荧光方法,包括以下具体步骤: 1荧光量子点标记cDNA复合物的制备:取50μL100nM修饰有生物素的cDNA与50μL100nM修饰有链霉亲和素的荧光量子点QD溶液放置于离心管中,25℃孵育1h,得到荧光量子点标记cDNA复合物QD-cDNA; 2磁珠-核酸适配体复合物的制备:取200μLpH7.5的WB缓冲液洗涤链霉亲和素修饰的磁珠三次,并将其重悬于100μLpH7.4的10mM的PBST缓冲液中,使磁珠的终浓度为150μgmL;随后加入50μL浓度为1μM的修饰有生物素的啶虫脒特异性核酸适配体Apt,涡旋30s后,在25℃下孵育1h,此时Apt上修饰的生物素与磁珠上面修饰的链霉亲和素相结合,形成磁珠-核酸适配体复合物MBs-Apt,磁性分离去除上清液后加入200μLPBST缓冲液,重复洗涤三次,去除上清液中多余的Apt,重悬于100μLPBST缓冲液中,制得磁珠-核酸适配体复合物MBs-Apt溶液; 3啶虫脒的荧光检测:取100μL步骤2中所制的MBs-Apt溶液、pH7.4的PBS缓冲液稀释的20μL一定浓度的啶虫脒溶液置于离心管中,涡旋10s,在30℃下孵育1h,随后加入50μL步骤1制备得到的荧光量子点标记cDNA复合物QD-cDNA,涡旋混匀,25℃孵育1h,随后用磁铁将磁珠与上清液分离,收集上清液,置于96孔黑色酶标板中,使用多功能酶标仪检测上清液的荧光强度; 步骤1中所述修饰有生物素的cDNA的核苷酸序列为:5'-Biotin-TCTTCATAATATGGTGTCAG-3'; 步骤2中所述修饰有生物素的啶虫脒特异性核酸适配体Apt的核苷酸序列为:5'-Biotin-CTGACACCATATTATGAAGA-3'。
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