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龙图腾网获悉南京农业大学三亚研究院;南京农业大学;新疆维吾尔自治区畜牧科学院申请的专利一种快速拯救牛冠状病毒流行株的方法及其应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN121046331B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-17发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202511555322.7，技术领域涉及：C12N7/01；该发明授权一种快速拯救牛冠状病毒流行株的方法及其应用是由平继辉;曾亦然;夏俊;高涵琼;卢渊录;范梦璐设计研发完成，并于2025-10-29向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种快速拯救牛冠状病毒流行株的方法及其应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种快速拯救牛冠状病毒流行株的方法及其应用。本发明通过对牛冠状病毒SHZ分离株进行高效分段克隆，并将所得片段与Linker序列进行环状聚合酶延伸反应，得到的反应产物无需纯化即可直接转染至293T细胞进行病毒的包装。与传统方法不同，本发明无需借助细菌和酵母来放大全长病毒cDNA克隆，而是通过PCR直接获得足够量的初步产物，避免了病毒基因组部分序列在细菌或酵母宿主中增殖时的不稳定性以及效率低下的问题。采用该反向遗传系统成功拯救表达外源蛋白的重组牛冠状病毒，不仅为病毒体内外复制动态的可视化研究提供全新的技术平台，也为病毒学研究、病毒载体疫苗的开发和抗病毒药物的筛选提供高效、灵活的工具。

本发明授权一种快速拯救牛冠状病毒流行株的方法及其应用在权利要求书中公布了：1.一种快速拯救牛冠状病毒流行株的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤： 1对牛冠状病毒SHZ分离株的基因组进行分段克隆，获得六个DNA片段A-F；所述六个DNA片段A-F的核苷酸序列如SEQIDNO:1-6所示； 2设计Linker序列，所述Linker序列依次包含：30-50bp牛冠状病毒3’UTR序列、丁型肝炎核酶序列、BGHpolyA信号序列、CMV启动子序列和30-50bp牛冠状病毒5’UTR序列；所述的CMV启动子序列如SEQIDNO:7所示，所述的丁型肝炎核酶序列如SEQIDNO:8所示，所述的BGHpolyA信号序列如SEQIDNO:9所示，所述5’UTR序列如SEQIDNO:10所示，所述3’UTR序列如SEQIDNO:11所示； 3将步骤1中的六个DNA片段A-F与步骤2设计的Linker序列混合进行CPER反应，得到CPER反应产物； 4步骤3得到的CPER反应产物无需体外纯化，直接转染至293T细胞中进行病毒包装； 5将转染后的293T细胞与HRT-18G细胞进行共培养，拯救并获得重组牛冠状病毒。

如需购买、转让、实施、许可或投资类似专利技术，可联系本专利的申请人或专利权人南京农业大学三亚研究院;南京农业大学;新疆维吾尔自治区畜牧科学院，其通讯地址为：572025 海南省三亚市崖州区崖州湾科技城振州路梧桐产业园区9栋；或者联系龙图腾网官方客服，联系龙图腾网可拨打电话0551-65771310或微信搜索“龙图腾网”。

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