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龙图腾网获悉赛奥斯博生物科技(北京)有限公司申请的专利一种利用单采血获得高纯度NK细胞分离及培养方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN121046310B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-17发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202511588852.1，技术领域涉及：C12N5/0783；该发明授权一种利用单采血获得高纯度NK细胞分离及培养方法是由刘红;侯国栋设计研发完成，并于2025-11-03向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种利用单采血获得高纯度NK细胞分离及培养方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种利用单采血获得高纯度NK细胞分离及培养方法，属于细胞培养领域。所述方法包括以下步骤：1采用单采血液成分法获取外周血单个核细胞；2向所述外周血单个核细胞中加入NK细胞分选试剂混合均匀，室温静置，得到细胞混合液；之后将所述细胞混合液加入淋巴细胞分离液的上层，离心，去除白膜层及其以上的透明血浆，收获的细胞液进行洗涤，得到富集后的NK细胞；3采用CD56阳选磁珠进行纯化，得到纯化后的NK细胞；4将纯化后的NK细胞接种包被CD16抗体的培养容器中，静置培养。该方法可以获得纯度高达99%以上的NK细胞，并且体外培养17天扩增达到数百倍以上，在低效靶比表现出强大的抗肿瘤功能。

本发明授权一种利用单采血获得高纯度NK细胞分离及培养方法在权利要求书中公布了：1.一种NK细胞在制备提高抗非小细胞肺癌功能的药物中的应用，其特征在于，所述NK细胞与非小细胞肺癌细胞在效靶比为0.5:1时，肿瘤细胞杀伤效率为90%以上； 所述NK细胞获得方法包括以下步骤： 1采用单采血液成分法获取单采血单个核细胞； 2向所述单采血单个核细胞中加入NK细胞分选试剂混合均匀，室温静置，得到细胞混合液；之后将所述细胞混合液加入淋巴细胞分离液的上层，离心，去除白膜层及其以上的透明血浆，收获的细胞液进行洗涤，得到富集后的NK细胞； 3将富集后的NK细胞采用CD56阳选磁珠进行纯化，得到纯化后的NK细胞； 4将纯化后的NK细胞接种包被CD16抗体的培养容器中，静置培养； 在步骤1中，所述单采血单个核细胞的细胞数为10亿，使用PBS进行3-5倍稀释后再与所述NK细胞分选试剂混合； 在步骤2中，每毫升稀释后的单采血单个核细胞中含108个细胞，稀释后的单采血单个核细胞与NK细胞分选试剂的体积比为25:1； 在步骤2中，所述细胞混合液与所述淋巴细胞分离液的体积比为5:4；离心条件为：采用快升慢降模式进行离心，升速时间为150s，降速时间为1800s，转速为460g，离心时间为30min； 收获的细胞液用生理盐水洗涤，所述细胞液和所述生理盐水的体积比为4:15，洗涤条件为：采用等速升降模式离心洗涤，升速时间和降速时间均为150s，转速为300g，时间为10min； 在步骤3中，所述采用CD56阳选磁珠进行纯化包括以下步骤： S1：用分选缓冲液重悬富集的NK细胞，过滤，离心，收集细胞沉淀； S2：将所述细胞沉淀重悬后添加CD56阳选磁珠，混匀后进行孵育； S3：孵育结束后，向孵育混合液中添加分选缓冲液后，离心，弃去上清液，并用分选缓冲液重悬沉淀，过柱分选，得到纯化后的NK细胞； 在S2中，所述重悬为：每1×107个富集后的NK细胞用50-100μL分选缓冲液重悬； 所述分选缓冲液与所述CD56阳选磁珠的体积比为50-100:20； 在S3中，所述孵育混合液中，按照每1×107个富集后的NK细胞添加1-2mL分选缓冲液进行混合；所述离心为：200-300g离心10min；所述重悬为：每1×108个细胞用400-500μL的分选缓冲液进行重悬； 在NK细胞培养Day0，将高度纯化的NK细胞以2-3×106cellsmL接种至包被CD16抗体的T75瓶中，使用培养基为IMediamforNK培养基，加入1000IUmL重组人IL-2、30ngmL重组人IL-15、30ngmL重组人IL-12和50ngmL重组人IL-21，放入37℃、5%CO2培养箱静置培养17天，在细胞培养Day5-17，每48h补液一次。

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