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浙江隆基生物技术有限公司郑曙剑获国家专利权

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龙图腾网获悉浙江隆基生物技术有限公司申请的专利一种快速构建IgG抗体高表达稳转CHO细胞株的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN120665950B

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-17发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510967911.X,技术领域涉及:C12N15/85;该发明授权一种快速构建IgG抗体高表达稳转CHO细胞株的方法是由郑曙剑;陈燕梅;沈文婷设计研发完成,并于2025-07-14向国家知识产权局提交的专利申请。

一种快速构建IgG抗体高表达稳转CHO细胞株的方法在说明书摘要公布了:本发明适用于生物技术和细胞生物学技术领域,提供了一种快速构建IgG抗体高表达稳转CHO细胞株的方法,包括如下步骤:S1.抗体质粒构建;S2.细胞复苏、传代和质粒转染;S3.阳性细胞筛选;S4.制备、筛选高表达的稳转单细胞克隆;S5.细胞补料分批培养;S6.抗体表达的细胞株稳定性验证,本发明提供的方法在质粒载体通过电转进入细胞后,在48h的静置培养后,就进行震荡培养,可加快细胞恢复时间,比传统静置培养恢复快,细胞状态也比静置状态好;在细胞补料分批培养时接种高密度的细胞,在如此高密度接种下,细胞对数生长期变短,更早的进入生产蛋白期,从而能达到更高的表达量,大大缩短了总体的生产周期,节约大量成本。

本发明授权一种快速构建IgG抗体高表达稳转CHO细胞株的方法在权利要求书中公布了:1.一种快速构建IgG抗体高表达稳转CHO细胞株的方法,其特征在于,包括如下步骤: S1.抗体质粒构建:将抗体轻重链基因连接至哺乳动物表达载体,转化、提取得到抗体质粒; S2.细胞复苏、传代和质粒转染:CHO细胞复苏后直接进行震荡培养,并通过电转法转染所得抗体质粒;其中,所述细胞复苏所使用的基础培养基中加入:1-2%海藻糖、0.05-0.1mM亚硒酸钠及3-8mML-脯氨酸; S3.阳性细胞筛选:转染后48小时内施加筛选压力,并在震荡条件下进行加压筛选;具体步骤如下:在T25瓶静置48h培养之后,MSX加压;由T25瓶转移至50mLTPP摇管中震荡培养,前5天每隔一天加入1-3mL新鲜培养基,同时加压;之后5天每隔36h离心换液,同样体积重悬,MSX加压,处理细胞时记录细胞的数目,活率以及细胞直径,再经过2天之后,细胞便可正常增殖,获得稳定转染质粒的阳性细胞;在筛选中添加代谢激活剂组合,所述代谢激活剂组合包括:1-5mM丁酸钠与0.5-2mM丙戊酸; S4.制备、筛选高表达的稳转单细胞克隆:采用有限稀释法制备单细胞克隆,并通过高通量筛选获得高表达克隆; S5.细胞补料分批培养,具体为:对筛选克隆进行补料分批培养,在E125摇瓶中接种2.5×106-3.5×106cellsmL的细胞初始密度,总体积为15-30mL,利用补料培养基补料12-14天;所述补料分批培养采用分阶段补料: a第0-4天:补含6-8gL葡萄糖及2×氨基酸的培养基; b第5-10天:补含1-2gL葡萄糖及3%脂质前体的培养基; c第11-14天:补含5mM丁酸钠的无糖培养基; S6.表达抗体的细胞株稳定性验证:验证细胞株传代稳定性至至少20代。

如需购买、转让、实施、许可或投资类似专利技术,可联系本专利的申请人或专利权人浙江隆基生物技术有限公司,其通讯地址为:310000 浙江省杭州市临安区锦南街道锦天路298号;或者联系龙图腾网官方客服,联系龙图腾网可拨打电话0551-65771310或微信搜索“龙图腾网”。

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