山东省分析测试中心赵恒强获国家专利权
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龙图腾网获悉山东省分析测试中心申请的专利一种基于灵芝抗氧化活性成分的指纹图谱的构建方法及其应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119936248B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-17发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510110853.9,技术领域涉及:G01N30/02;该发明授权一种基于灵芝抗氧化活性成分的指纹图谱的构建方法及其应用是由赵恒强;胡思萌;王晓;闫慧娇;张敏敏设计研发完成,并于2025-01-23向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种基于灵芝抗氧化活性成分的指纹图谱的构建方法及其应用在说明书摘要公布了:本发明涉及中药成分研究技术领域,具体涉及一种基于灵芝抗氧化活性成分的指纹图谱的构建方法及其应用。首先,构建了自由基清除活性导向下的超声辅助酸解灵芝粗多糖的方法,方法高效、可操作性好,能较好的体现灵芝粗多糖解聚物的自由基清除活性。采用亲水色谱‑电雾式检测器‑电喷雾质谱对52个批次不同来源的灵芝多糖进行酸解和分析,进一步结合灰色关联分析和偏最小二乘回归分析,筛选出12个活性共有峰,建立了基于灵芝抗氧化活性成分的指纹图谱。最后,利用主成分分析法和偏最小二乘判别分析法分别分析标准赤芝、紫芝、树舌灵芝、黑灵芝以及样品灵芝的基于灵芝抗氧化活性成分的指纹图谱,实现灵芝品种的鉴别。
本发明授权一种基于灵芝抗氧化活性成分的指纹图谱的构建方法及其应用在权利要求书中公布了:1.一种基于灵芝抗氧化活性成分的指纹图谱的构建方法,其特征在于,包括以下步骤: 1将不同品种的灵芝干燥子实体粉碎后进行水提醇沉,获得灵芝粗多糖; 2将灵芝粗多糖在限定的条件下进行水解,获得灵芝多糖水解产物; 3采用亲水色谱-电雾式检测器-电喷雾质谱UPLC-CAD-ESI-Q-TOFMS测量并确定灵芝多糖水解产物中含有的化学成分,初步鉴定了29种化学成分; 4将灵芝粗多糖的抗氧化性与步骤3中筛选出的29种化学成分的峰面积进行灰色关联度分析,确定29种化学成分为抗氧化活性成分; 5采用偏最小二乘回归法从29种化学成分进行筛选,获取12种化学成分,以这12种化学成分作为共有峰,建立基于灵芝抗氧化活性成分的指纹图谱; 所述限定的条件为:将灵芝粗多糖溶于水中,获得灵芝粗多糖溶液;向灵芝粗多糖溶液中加入三氟乙酸,超声水解; 其中,三氟乙酸的浓度为3~6molL;超声的功率为245~350W;超声的温度为70~100℃;超声的时间为5~30min; 步骤3中,色谱条件为:色谱柱:XbridgeTMBEHAmide柱,规格为2.1×150mm,2.5μm;流动相A为0.8%甲酸20M甲酸铵水溶液,流动相B为0.8%甲酸乙腈溶液,梯度洗脱; 梯度洗脱条件包括:0~13min,91%B~90%B;13~20min,90%B~80%B;20~40min,80%B;40~41min,80%B~74%B;41~50min,74%B;50~51min,74%B~60%B;51~60min,60%B; 检测时,流速为0.2~0.3mLmin;进样量为9~12μL;色谱柱的柱温为20~30℃; ESI-TOFMS条件为:分别在正离子模式和负离子模式下工作,喷雾器的压力为1.8~2.2Bar;干燥气体的流速为7~10mLmin;干燥气体温度为200~240℃;毛细管电压在正离子模式下为3400~3600V;毛细管电压在负离子模式下为2900~3200V;扫描的质荷比mz范围为100~2000; 步骤5中,基于灵芝抗氧化活性成分的指纹图谱包括12种化学成分的共有峰,分别为peak25、peak27、peak16、peak14、peak26、peak1、peak8、peak29、peak3、peak13、peak20和peak17; 其中peak25的保留时间为35.0~35.5min;peak27的保留时间为40.2~40.7min;peak16的保留时间为26.2~26.8min;peak14的保留时间为25.5~26.0min;peak26的保留时间为33.8~34.3min;peak1的保留时间为3.0~3.5min;peak8的保留时间为18.8~19.3min;peak29的保留时间为27.3~27.8min;peak3的保留时间为6.8~7.3min;peak13的保留时间为25.0~25.6min;peak20的保留时间为27.7~28.3min;peak17的保留时间为26.6~27.2min。
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